微生物有機肥料中有效活菌數的國家標準測定方法及步驟

（1）稀釋

稱取固體樣品10g，加入帶玻璃珠的100ml的無菌水中，靜置20分鐘，在旋轉式搖床上200r/min充分震蕩30分鐘，即成母液菌懸液。

用5ml無菌轉液管分別吸取5ml上述母液菌懸液加入45ml無菌水中，按1比10進行系列稀釋，分別得到10-1,10-2,10-3、、、稀釋倍數的菌懸液。

（2）加樣及培養

每個樣品取3個連續適宜稀釋度，用0.5ml無菌移液管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1ml，加至預先制備好的固體培養基平板上，分別用無菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂布于瓊脂表面。

每一稀釋度重復3次，同時以無菌水作空白對照，于適宜的條件下培養。

（3）菌落識別

根據所檢測菌種的技術資料，每個稀釋度取不同類型代表菌落通過涂片、染色、鏡檢等技術手段確認有效菌。當空白對照培養皿出現菌落數時，檢測結果無效，應該重做。

（4）菌落計數

以出現20-30個菌落數的稀釋度的平板為計數標準，（絲狀真菌為10-150個菌落數），分別統計有效活菌數目和雜菌數目。當只有一個稀釋度，其有效菌平均菌落數在20-300個之間時，則以該菌落數計算。若有兩個稀釋度，其有效菌落數在20-300個之間時，應該兩者菌落總數之比值決定，若其比值小于等于2應該計算兩者的平均數；若大于2，則以稀釋度小的菌落數平均數計算。有效活菌數按下列公式計算，同事計算雜菌數。

N1=(x*k*v1/m0*v2)*108    N2=(x`*k*v1/v0*v2)*108

式中：

N1——————質量有效活菌數，單位為億每克；

N2——————體積有效活菌數，單位為億每毫升；

x·——————有效菌落平均數；

K———————稀釋倍數；

V1———————基礎液體積，單位為毫升；

V2———————菌懸液加入量，單位為毫升；

V0———————樣品量，單位為毫升；

M0———————樣品量，單位為克。